1、試劑準(zhǔn)備區(qū)。
用于準(zhǔn)備試劑。該區(qū)域?yàn)檎龎?,以防止污染物溢出。該區(qū)域可分為三個(gè)區(qū)域:普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)。PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)和PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)。在普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)準(zhǔn)備一些核酸提取所需的裂解液和提取液;PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)用于制備和保存PCR試劑。例如,準(zhǔn)備PCR試劑,如引物和探頭。為了防止交叉污染,避免重復(fù)冷凍和解凍,試劑儲(chǔ)存溶液應(yīng)平均體積小,儲(chǔ)存在該房間后使用:主反應(yīng)混合物(樣品除外)將用于PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)。將所有PCR所需試劑的混合物添加到PCR管中的操作。重要提示:其他房間的材料(包括膨脹、模板和目標(biāo)核酸或陽(yáng)性對(duì)照)不得帶入試劑準(zhǔn)備區(qū)。
2、樣品準(zhǔn)備區(qū)。
該區(qū)域沒有壓力設(shè)置要求。該區(qū)域用于分割樣品、研磨、破碎和均勻漿液的區(qū)域。因?yàn)樵谶@些破碎、研磨和均勻漿液處理過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生氣溶膠,因此存在陽(yáng)性樣品污染后續(xù)操作的可能性。該區(qū)域應(yīng)與后面的區(qū)域嚴(yán)格隔離,并應(yīng)放置在與后面三個(gè)區(qū)域分離的獨(dú)立房間中。樣品準(zhǔn)備區(qū)還可以設(shè)置專門的封閉區(qū)域或房間,用于接收和存放樣品。這個(gè)房間可以放在冰箱里存放樣品,應(yīng)該和樣品準(zhǔn)備區(qū)的其他區(qū)域隔離。樣品準(zhǔn)備區(qū)域的人員不得進(jìn)入試劑準(zhǔn)備區(qū)域。
3、核酸提取區(qū)。
核酸提取區(qū)是從樣品中提取核酸的區(qū)域。該區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以防止核酸溢出造成的污染。樣品準(zhǔn)備區(qū)還包括從樣品中提取和純化核酸的區(qū)域,以及將核酸添加到含有PCR主反應(yīng)混合管的操作區(qū)域。添加樣品后,應(yīng)盡快覆蓋PCR管的蓋子。當(dāng)使用PCR板和橡膠蓋時(shí),陽(yáng)性控制和包含目標(biāo)序列的樣品應(yīng)與要測(cè)量的樣品分開操作,以避免添加模板時(shí)的交叉污染。
重要提示:本房間內(nèi)的所有物品不得帶人試劑準(zhǔn)備區(qū)。
4、擴(kuò)大和產(chǎn)品檢測(cè)區(qū)域。
該區(qū)域用于PCR擴(kuò)增和PCR分析。PER儀器被放置在這個(gè)區(qū)域。為了防止核酸溢出,房間保持負(fù)壓。這個(gè)地區(qū)的人bi須一直穿工作服。
離開房間前脫下手套,防止擴(kuò)增子污染其他地方。所有用于擴(kuò)增和產(chǎn)品檢測(cè)的設(shè)備都應(yīng)指定用于該房間。PCR分析]di二項(xiàng)工作也設(shè)置在該區(qū)域,如酶切、測(cè)序、克隆等,但實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡可能將這些活動(dòng)與不同的區(qū)域或房間分開。降低擴(kuò)增產(chǎn)品的污染風(fēng)險(xiǎn)。如果沒有條件在該區(qū)域設(shè)置負(fù)壓,則bi須在該區(qū)域設(shè)置排氣裝置。
重要提示:此房間的物品不能帶人樣品準(zhǔn)備區(qū)或試劑準(zhǔn)備區(qū)。